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徕卡 101 样本诊断流程小贴士:第64-72步
(发布日期:2020-9-25 13:52:06)  浏览人数:110

第64-72步

徕卡101

组织脱水、透明、浸蜡、包埋

从患者到病理学家,准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。


徕卡特地为大家整理了取材、组织脱水、透明、浸蜡、包埋以及染色等(常规、特殊、IHC以及FISH)101步操作流程,帮助大家更有效、更简单地获得实验方案,避免错误的发生。


步骤六十四

了解染色

🙆 正确:了解你正在做的染色。

🙅 错误:只是“跟随操作方法”,而不是真的知道染色结束需要观察什么,可能会导致不够好的染色结果。

A.PAs肝染色,正常情况下,脂褐素及糖原PA染色呈阳性,胆汁和含铁血黄素PAS染色呈阴性(分别为黄色和棕色)。

B.银 Gomer i染色方法染肺部真菌(曲霉属)感染。大多数城市居民和吸烟者肺中的一个共同特征,即真菌的菌丝在非染色情况下都是黑色的。


步骤六十五

使用阳性对照

🙆 正确:总是使用阳性对照片可以清晰的知道,是否包含想要展示的结构/物质。

🙅 错误:如果我们在玻片中没有看到想要显示的结构或物质,我们认为它是不存在的。

使用Perl’s方法证明肝硬化含铁血黄素(蓝色)包含铁。这是一个较好的铁阳性对照染色。


步骤六十六

使用精确时间

🙆 正确:使用精确时间

🙅 错误:时间总是大概。不精确的时间产生不一致的结果。

这两张皮肤玻片来自同一块蜡块,同样使用PAS染色。A玻片酸处理(氧化步骤)为5分钟,而B玻片只有30秒(错误)。结果B玻片基底膜染色效果很差。


步骤六十七


🙆正确:注意使用试剂的保质期。部分试剂或染料溶液会渐渐改变,另一些试剂和染料溶液不稳定,必须即配即用,还有的需要经过一段时间的氧化(成熟)才可以使用。

🙅 错误:我们假设所有的试剂都可用于不确定的周期。

Weigert’s 苏木素由于过氧化呈现不干净的染色效果,请注意胶原的棕色染色。


步骤六十八

正确储存试剂

🙆 正确:正确储存试剂。有些试剂需要冷藏,因为容易滋生真菌或霉菌。有的光敏感试剂,需要在黑暗中储存。

🙅 错误:“我们所有的试剂都储存在染色平台上的架子上。有时我们能在玻片上看到散在的其他有机物。”

使用长了微生物的染色溶液(苏木素)对玻片进行染色,可见大量外来微生物覆盖在组织切片顶部。


步骤六十九

遵守染色方法

🙆 正确:认真完成程序的每一步。

🙅 错误:当使用相同的程序时,不同操作人员取得不同的染色结果。

777.jpg

福尔马林固定的粘膜下层进行马松三色染色( Masson trichrome)。在正确执行染色步骤时,包括第一步铬酸染色(敏化或二媒染),A玻片呈现红色的平滑肌。B玻片染色时,这一步被跳过,B玻片中可见肌肉缺乏差异性着色(小肠)。


步骤七十

记录所有更改

🙆 正确:记录所有实验中偏离。

🙅 错误:染色结果不好,却很难找寻原因,因为程序变化时没做记录。

888.jpg

浸银染色网状纤维有背景(沉淀),如果染色时没有精确的执行染色步骤,则很难确定引起这样问题的原因,( Gordon& Sweets染色法,肾脏)。


步骤七十一


🙆正确:注意洗涤步骤。尽可能规范操作,因为这经常引起结果的变化。

🙅 错误:实验室工作人员使用不同的洗涤方法,有些人使用剧烈的搅拌,另一些则更为温和。

999.jpg

使用相同的方法进行肝染色,唯一的区别是操作人员冲洗,洗涤步骤。网状纤维均为黑色,但A比B呈现的更好( Gordon& Sweets法)。


步骤七十二

认真设置显微镜

🙆正确:在关键阶段,如分化步骤使用显微镜在微观下观察控制。要注意在玻片湿润未封片的情况下,显微镜的设置,可能呈现虚假的背景染色。

🙅 错误:对所有染色方法都只用裸眼观察玻片。

101010.jpg

A.湿组织(无盖玻片)在显微镜下看关闭闭聚光器和光阑。注意假背景。

B.湿组织(无盖玻片)在显微镜下看打开聚光器和光阑。注意清晰的背景。


接下来我们将会为大家带来切片、优化脱蜡和试剂应用、考虑抗体交叉反应等操作流程小贴士,感兴趣的话可以关注我们徕卡101系列,后续我们将会为您奉上更详尽的内容。







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