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徕卡101样本诊断流程小贴士:第52-63步
(发布日期:2020-9-10 15:52:42)  浏览人数:50

第52-63步

徕卡101


组织脱水、透明、浸蜡、包埋


从患者到病理学家,准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。


徕卡特地为大家整理了取材、组织脱水、透明、浸蜡、包埋以及染色等(常规、特殊、IHC以及FISH)101步操作流程,帮助大家更有效、更简单地获得实验方案,避免错误的发生。


步骤五十二

使用精确的时间

🙆 正确:在染色程序中的每一步都需要是精确的时间。

🙅 错误:步骤时间染色要求是一致的,“如果染色时间有限”有些步骤被跳过,这可能产生不一致的结果。

这些组织是从同一个蜡块切下的相同厚度,使用的是相同的HE方法,只是由不同的工作人员手工染色。结果是:宏观上都可以看到不一致的染色结果。


步骤五十三

定期监测质量

🙆 正确:定期进行内参玻片染色,以监控染色质量。

🙅 错误:HE染色从不使用内参玻片,在染色出现问题时,很难确认是染色试剂,染色程序或固定不良的原因。

肾组织包括各种嗜酸细胞和保存完好的核组织元素,可以可靠的评估H染色质量。胎盘是另一种有效的阳性对照标本。


步骤五十四

规范化染色条件

🙆 正确:优化所有染色步骤:搅拌,洗涤和排水的时间。

🙅 错误:搅拌,洗涤和排水的时间不一致。溶剂和试剂迅速被污染。染色效果不一致。

使用自动染色仪的好处之一是搅拌、洗涤和排水时间是一致的。可保证其他变量的可控性,这将确保良好的,一致的染色结果。


步骤五十五

确保彻底脱蜡

🙆 正确:玻片脱蜡彻底。

🙅 错误:玻片脱蜡有时不完全或玻片包含残留蜡块。可能导致无法染色,或不均匀染色区域。

该HE染色切片显示整个左侧区域和部分几个较小的区域,部分染色或未染色。这是由于前期不完全脱蜡导致。


步骤五十六

定期更新试剂

🙆 正确:溶剂和染色剂被定期更换的频率,取决于处理的玻片染色或蜡块的数量。

🙅 错误:随机的更换溶剂和染色试剂。直到染色质量下降才会更换试剂。

很差的染色质量,苏木素染色效果很差,该试剂应立即更换。


步骤五十七

彻底水化

🙆 正确:玻片在苏木素染色之前需要彻底水化。

🙅 错误:苏木素溶液混入酒精或二甲苯,导致不均匀的染色。

该皮肤表皮的苏木素染色不均匀是由于残余的二甲苯(和蜡)引起的。


步骤五十八

苏木素质量监控

🙆 正确:因苏木精染色液会逐步被玻片和染色架携带的试剂稀释和继续氧化,故苏木素溶液的性能需要进行仔细的监控。

🙅 错误:苏木素染色能力是每天变化的并且无法知道变化规律的。例如,染色缸的表面面积,在染色过程中的通透程度,和周围的温度均可影响氧化速率。

同一蜡块切同样厚度的2张玻片,使用自动染色机,相同的程序,间隔七天H&E染色显示,即使是肉眼观察,染色效果的变化也是十分明显的。


步骤五十九


🙆正确:苏木精染色后,一般通过 Scott’s碱性自来水或氨水进行彻底的“返蓝”。此方法受当地自来水的自然PH值影响。

🙅 错误:有时由于未完全“返蓝”,细胞核会呈现粉红色。细胞核在苏木素未染(过分化)或伊红过染也可能呈现粉红色。

A.表皮细胞核的界限不清并被染成了粉红色。原因是苏木素染色后在碱性水中未恰当的“返蓝”(皮肤HE)。

B.苏木素染色后怡当“返蓝”的核染色效果。这幅图的核拥有更好的边界(皮肤,氢和电子)。


步骤六十


🙆正确:“返蓝”后的步骤需要非常彻底的清洗,以便去除自来水中残留的碱,以防止其中的碱阻碍后续伊红染色,引起染色淡或染色不均匀。

🙅 错误:不完全冲洗“返蓝”(清洗后留下的残余碱)使伊红染色变弱或不均匀。

剩余碱对伊红染色的影响。注意片状染色效果(脾HE)。


步骤六十一

伊红PH监测

🙆 正确:对伊红溶液的pH监测。保持最佳染色,保持PH5.0。加入醋酸可便捷的降低pH值。没有刻意监控伊红pH。

🙅 错误:当染色强度下降选择替换溶液(碱性自来水的携带带入能引起伊红溶液的pH上升)。

肺组织H&E染色,因伊红染色太弱,而不可接受的染色结果。请注意,只有红细胞部分被伊红染色。 


步骤六十二

透明和盖片前需要彻底脱水

🙆 正确:放置在二甲苯前需要彻底脱水。

🙅 错误:组织有时会经过酒精步骤后进入二甲苯。在有水污染的二甲苯中透明,可能会导致在组织中有微小水滴的存在,该区域在显微镜微观处为看不到细节的不透明区域。

整张玻片缺乏清晰度(肉眼宏观看不岀来)。仔细检查发现整张玻片存在微小的水滴。


步骤六十三


🙆 正确:使用前要保证盖玻片是干的,并使用高质量的封固剂。在使用长期贮藏的盖玻片前必须提前确认盖玻片品质,长时间(几个月或几年)的存储可能导致盖玻片质量变差。

🙅 错误:在盖玻片盖片前组织只有部分完全干燥,可能造成部分核呈黑色。如果封固剂的选择是基于价格,则该种盖玻片长期储存可能导致封固剂结晶或盖玻片脱落。

A.在盖玻片盖片前组织只有部分完全干燥。这导致了微小气泡被困在核内,使其呈现黑色(有时被称为“玉米片”)。

B.使用储存了六个月的质量差的封固剂封,,H&E玻呈现大量折射球晶。


接下来我们将会为大家带来切片、染色、正常储存试剂等操作流程小贴士,感兴趣的话可以关注我们徕卡101系列,后续我们将会为您奉上更详尽的内容。



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